GPComplex甘草多糖抗非小細胞肺癌藥效學研究

2023-04-10

GPComplex 甘草多糖抗非小細胞肺癌藥效學研究總結報告

一、試驗目的

觀察灌胃給予GPComplex甘草多糖對人源肺癌H460細胞小鼠體內移植模型的作用，對環磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的調節作用，從抑制腫瘤生長、提高免疫方面初步評價GPComplex甘草多糖的抗腫瘤作用，探索劑量反應關系、程度等，并大致判斷其是否具有毒性、程度及劑量反應關系，為甘草多糖后續開發提供藥效學依據。

二、腫瘤細胞株

人大細胞肺癌細胞H460，購自中國科學院上海生命科學研究院

三、劑量設置、組別設置、給藥途徑及選擇依據

甘草多糖：根據合同規定，甘草多糖的小鼠給藥劑量設置低、中、高三個劑量，分別為0.25 g·kg^-1、0.5 g·kg^-1、1 g·kg^-1。

紫龍金：臨床日用量為0.65 g/片×4片/次×3次/天=7.8 g，人按60 kg計，小鼠按20 g計，按體表面積換算小鼠的臨床等效劑量為1.5 g·kg^-1。將紫龍金劑量設置為3 g·kg^-1，為臨床等效劑量的兩倍。

索拉菲尼：臨床日用量為0.2 g/片×2片/次×2次/天=0.8 g，人按60 kg計，小鼠按20 g計，按體表面積換算小鼠的臨床等效劑量為0.15 g·kg^-1。并根據前期該藥的試驗結果，將索拉菲尼劑量設置為50 mg·kg^-1，為臨床等效劑量的三分之一。

抗腫瘤試驗：共設計6組，分別為對照組、紫龍金組、索拉菲尼組、甘草多糖低、中、高劑量組，每組7只。

調節免疫功能試驗：共設計6組為，分別對照組、模型組、紫龍金組、甘草多糖低、中、高劑量組，每組10只。

甘草多糖擬臨床用藥途徑為口服給藥，因此選擇灌胃給藥；紫龍金及索拉菲尼均采用相似于臨床用藥途徑的灌胃給藥方式。

四、試驗方法

采用人肺癌H460細胞小鼠皮下移植模型，觀察GPComplex甘草多糖對腫瘤生長的抑制作用。選用Balb/c-nu雌性小鼠，接種H460腫瘤組織塊，待小鼠體內接種的腫瘤生長至100mm³左右時，依腫瘤體積分為對照組、甘草多糖高劑量（1 g·kg^-1）組、中劑量（0.5 g·kg^-1）組、低劑量（0.25 g·kg^-1）組、紫龍金（3 g·kg^-1）組、索拉菲尼（50mg·kg^-1）組，每組7只。分組后隨即每天灌胃給藥1次，對照組給予去離子水，共持續32天，于末次給藥后次日取血后脫頸處死取腫瘤稱重。試驗期內每周2次測量腫瘤體積及動物體重。
選用ICR雄性小鼠，隨機分為對照組，模型組，紫龍金（3 g·kg^-1）組、甘草多糖高劑量（1 g·kg^-1）組、中劑量（0.5 g·kg^-1）組、低劑量（0.25 g·kg^-1）組，每組10只。分組后即開始每天灌胃給藥1次，對照及模型組給予去離子水，共給藥14天。給藥第6、7天時，除對照組外，其余各組小鼠均腹腔注射環磷酰胺80mg·kg^-1，第15天眼眶靜脈叢取血，EDTA抗凝，用于淋巴細胞亞群分析：CD3+（T細胞）、CD3+CD4+（輔助性T細胞和遲發超敏性T細胞）、CD3+CD8+（抑制性T細胞和殺傷性T細胞）、CD3-CD19+（B細胞）、CD3-CD335+（NK細胞），統計各陽性細胞占淋巴細胞的百分比，并計算CD4/CD8的比值。

五、試驗結果及結論

1. 人肺癌H460細胞小鼠皮下移植模型試驗結果顯示，與對照組比較，GPComplex甘草多糖1 g·kg^-1給藥32天可使抑瘤率超過30%，達30.5%，且對小鼠體重無明顯影響，提示GPComplex甘草多糖具有抑制人源肺癌H460小鼠體內生長的趨勢，且無明顯毒副作用。

圖1甘草多糖對腫瘤H460體內增殖模型的影響

2. 環磷酰胺致小鼠免疫功能低下模型試驗結果顯示，與正常小鼠比較，模型組小鼠給予環磷酰胺后，CD3、CD4、CD8、CD19陽性細胞比例明顯下降，CD335陽性細胞比例明顯升高。與模型組比較，甘草多糖1 g·kg^-1給藥14天明顯升高CD3、CD4陽性細胞比例，降低CD335陽性細胞比例，逆轉環磷酰胺的不利影響。提示GPComplex甘草多糖1 g·kg^-1灌胃給藥14天，具有明顯促進T淋巴細胞增殖，提高機體免疫功能的作用。